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        標本檢測影響因素分析
        更新時間:2015-02-26 點擊次數:1177

        標本檢測影響因素分析如下:

        一、標本的影響:溶血標本及混有紅細胞的血清采ELISA用法檢測易產生假陽性??赡苁侨苎逯泻羞^氧化酶物質(紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素),在洗滌過程中往往難以*洗脫,它可使H2O2釋放出原生態氧(O),從而催化底物四甲基聯苯胺可溶性的有色物質,即顯藍色,產生假陽性[2]。所以嚴重溶血標本禁用。  標本受細菌污染。因菌體中可能含有內源性辣根過氧化物酶,因此,被細菌污染的標本同溶血標本一樣,亦可產生非特異性顯色而干擾測定結果。  標本保存不當。在冰箱中保存過久的標本,在間接法ELISA測定中會導致本底過深、造成假陽性;為克服上述干擾,ELISA試劑盒測定的血清標本宜為新鮮采集;如不能立即測定,5 d內測定的血清標本可存放于4℃,1周后測定的血清標本應低溫凍存;凍存后融解的標本,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混合后再測定,但混勻時應輕柔,不可強烈振蕩。  塑料試管能吸附抗原物質,樣本久置在塑料管內會使樣本內抗原含量下降造成假陰性。使用真空采血管;并使用非抗凝標本,肝素抗凝血漿會增加OD值,EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELISA系統中辣根過氧化物酶活性。  標本凝固不全。 在工作中,有時為了爭取時間快速檢測,常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結果;因此血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。

        二、 試劑影響  ELISA試劑盒檢測試劑廠家較多;不同廠家出產的試劑

        靈敏度與特異性存在一定的差別,使用質劣的試劑必然導致結果的假陽性或假陰性。因此,選擇高質量的試劑是保證結果準確的關鍵之一。

        三、操作技術的影響:吸量不準確,直接影響檢測結果。因此加樣器也要經常清洗,定期校準。 

        溫育影響:抗原抗體結合及酶促反應對溫度有嚴格要求,酶標板周圍與內部孔升降溫速率不同,造成周邊與內部孔結果差異;干浴與水浴存在明顯的差異,盡可能使用水浴,并要求固相板放入水中,減少受熱不均,貼密封膜,防止污物浸入。 

        加樣次序影響:有時我們在加樣過程中,常常會遇到個別標本未離心等情況,為了節約時間,往往這時我們會先加酶結合物,然后等標本分離好后再加標本,這樣,竟常常會造成HBeAb和HBcAb的假陰性。因為HBeAb和HBcAb都是競爭抑制法,先加入酶標記的抗體,首先與固相載體上的抗原結合,待加入顯色劑后,因酶的存在而顯色,故呈陰性[3]。 

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