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分析:常見ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)要點(diǎn)
更新時間:2017-09-15 點(diǎn)擊次數(shù):1963

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1. 準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品,如試管、吸頭、移液器、離心機(jī)等;
   

2. 根據(jù)檢測標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量;
   

3. 按說明書將所用試劑平衡至室溫,配制所需試劑;
   

4. 標(biāo)本制備要規(guī)范,每份標(biāo)本體積要按2-3個復(fù)孔以上的量制備,盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實(shí)驗(yàn)者,注意低溫保存。
   

    實(shí)驗(yàn)中為了確定*信號和zui低背景應(yīng)將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預(yù)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時,應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進(jìn)行操作。
   

    標(biāo)準(zhǔn)品的配制:對于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書,注意每批的細(xì)節(jié)。在使用細(xì)胞因子前,瞬時離心試劑瓶,盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說明書中的細(xì)節(jié),將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。
   

    一般待測抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml 到15pg/ml。可利用標(biāo)準(zhǔn)的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。
   

    為了優(yōu)化靈敏度,建議過夜孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng),應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉,疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。當(dāng)測定混合液體中的抗原時,如血清,建議在標(biāo)本稀釋液中加不相干的Ig。
   

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